DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA
Objetivo:
Determinar
cuantos gr de hemoglobina (Hb) hay en toda la sangre circulante, para tener un
diagnostico clínico ya que se pueden variar diversas enfermedades debido a un
valor anormal de Hemoglobina.
Fundamento:
La
hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y
dióxido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos
600gr. De hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxígeno.
existen
varios tipos de hb. en el ser humano se pueden encontrar las siguientes
hemoglobinas normales:
Hemoglobina
A: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas β en un adulto normal corresponde a mas
del 95% del total.
Hemoglobina
A´: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas δ en un adulto sano esta en porción menor
de 3%.
Hemoglobina
F (fetal): consta de 2 cadenas α y 2 cadenas γ. Es la hemoglobina principal en
el feto desde el 4° mes del embarazo hasta aproximadamente los 6 meses de edad.
La Hb F tiene mayor afinidad por el oxigeno.
Hemoglobina
Gower: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas ε. Desaparece casi por completo en el
tercer mes de embarazo y empieza a aparecer la Hb fetal.
La sangre
tiene un color rojo cereza brillante cuando el pigmento es carboxi-hemoglobina
en la intoxicación por CO. El color es chocolate en la metahemoglobulemia y la
banda malvada en alsulfohemoglobulemia.
Las
distintas Hb tienen espectros de absorción características a las que determina
en un espectrofótometro. La identificación de diferentes formas de la Hb con la
determinación de sus espectros de absorción puede hacerse de una manera
sencilla.
Material y Equipo:
· Un
espectrofotómetro.
· Una pipeta
de vidrio graduada de 5 mL
· Pipeta
semiautomática
· Tubos de
ensayo.
· Cubetas
cuadradas.
· Gradilla
· gasa
Reactivos:
· EDTA
· Reactivo Drabkin
· Ferrocianuro de
potasio
· Cianuro de
potasio
· Bicarbonato de
potasio
· Solución
estándar de cianometahemoglobina
Reactivos biológicos:
· Sangre venosa
con EDTA.
Técnica:
1.-En un tubo de ensaye colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin
y marcarlo como problema (P).
2.-Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).
3.- Mezclar perfectamente la sangre problema, por inversión por lo menos
20 veces antes de tomar la muestra.
4.-Con una pipeta automática o pipeta de Shalli se toma exactamente 0,02
mL (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.
5.-La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga
reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.
6.- Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con
mucha precaución (utiliza papel parafil para tapar los tubos, recuerda que el
reactivo tiene cianuro, el cual es muy peligroso).
7.-Dejar en reposo por espacio de 3 a 5 minutos. Para que
se efectúe la reacción.
8.-Después de ese tiempo se observara una coloración roja transparente,
se llena las cubetas hasta la marca que se encuentra y se procede la lectura.
9.-Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el
fotómetro con agua destilada / Drabkin.
Resultados:
Estos fueron los resultados que aperecieron en el espectrofotómetro.
Muestra 1
Muestra 2
Cálculos:
Muestra 1
.392/.340 x 15 = 17.29 g/dL
Muestra 2
.309/.340 x 15 = 13.41 g/ dL
Rango:
normal ya que las 2 muestras fueron realizadas en
mujeres.
Cálculos:
Hb total = concentración de
Hb (gr/ml) x volumen sanguíneo (ml).
en espectofotometro se aplica la siguiente formula:
muestra/ estandar x 15 = Hb
en espectofotometro se aplica la siguiente formula:
muestra/ estandar x 15 = Hb
Valores de referencia:
Niños al nacer……………………………..
13,6 - 19,6 g/dL
Niños de 1
año…………………………..... 11,3 - 13,0 g/dL
Niños de 10 -12
años……………………... 11,5 - 14,8 g/dL
Mujeres……………………………………...
11,5 - 16,5 g/dL
Hombres…………………………………….
14,0 - 18,0 g/dL
