PRÁCTICA DE VDRL

PRÁCTICA DE VDRL

PRÁCTICA DE VDRL - USR

Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin inactivar, en Plasma y L. C. R. (no requiere reconstitución)

Agente de Diagnóstico

Introducción

Treponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis, una enfermedad que generalmente se transmite por vía sexual.

Su diagnóstico puede ser serológico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos:

1.    Tipo “cardiolipina”.- No treponema e inespecíficos

2.    Antitreponemas específicos

La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratoy VDRL se le conoce como una prueba para sífilis no-treponemica. Es parte de la exploración inicial de la sífilis e iniciar un tratamiento. Con  el método cualitativo empleando la  placa presenta floculación, si se presenta el caso se lleva a cabo el método cuantitativo con el o los sueros positivos.

También se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, así como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

Reactivos y material proporcionado

-Antígeno en suspensión  estabilizada (VDRL)

-Control positivo

-Control negativo

-AGUJA No. 21sin bisel

-Pipetas  desechables (únicamente para presentaciones de 100 pruebas)

Estabilidad y almacenamiento del reactivo

El antígeno VDRL y los Sueros Controles  son estables hasta su  fecha de caducidad indicada en la etiqueta cuando de almacena de 2° a 8° C   NO CONGELAR.

Material y equipo necesario no proporcionado.

-Placa cóncava (indispensable)

-Agitador Mecánico

-Cronometro

-Microscopio

Obtención de la muestra

 

- Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa.

- Centrifugar y separar el suero.

Método cualitativo.

1. En un anillo de la placa cóncava  depositar 0.05 ml de suero problema.
2.  En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra por separado una gota de control negativo, extender sobre la superficie de los anillos
3.  Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado previamente resuspendido en cada una de las muestras utilizando la aguja  N.21 sin bisel.
4. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede provocar la evaporación de las muestras; por lo tanto la placa en rotación puede ser cubierta con una tapa de caja petri húmeda previamente con grasa.
5.    Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10X.

INTERPRETACIÓN

1. Control Positivo
   
   
    Presencia de floculación  mediana o grande.
   
   
   Control Negativo
   
   
   Ausencia de floculación.
   
      
   Método cuantitativo.
   1.      Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
   
   
   2.      Colocar en una gradilla 6 tubos  de 12 x 75 mm y numerarlos.
   
   
   3.      Agregar a cada uno 0.5 ml. de solución salina al 0. 9%.
   
   
   4.      Depositar 0.5 ml. de suero al tubo No.1 y mezclar.
   
   
   5.      Pasar 0.5 ml. del tubo No. 1 al tubo No.2 mezclar.
   
   
   6.      Pasar 0.5 ml. del tubo No.2 al tubo No. 3 mezclar.
   
   
   7.      Continuar con este proceso hasta el tubo 6.
   
   
   8.      Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa cóncava.
   
   
   9.      Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin bisel a cada una de las  diluciones.
   
   
   10.  Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min.
                                                                                                       
   11.  Leer al microscopio con objetivo y ocular 10x.
   
   
    Interpretación.
   
   
   El título del suero problema será la última dilución que presente un resultado positivo. Ejemplo:
   
   
   Si se presenta floculación hasta el tubo 3 – dilución 1:8, por lo tanto el título será 1:8.
   
   
   1.      Nota: 
   Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.
   2.      
   Sueros débiles positivos y fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de prozona.
   3.      
   Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 min. puede secarse la reacción y dificultad en la interpretación.
   4.      
   El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.
   
   
   
   
   
   
   Conclusión
   Esta práctica nos sirve para identificar la enfermedad de transmisión sexual sífilis es una técnica inmunológica rápida y sencilla de realizar

Recuento de Plaquetas

Recuento de Plaquetas

                                                                   Recuento de plaquetas 


Objetivo:

Que el alumno aprenda a contar correctamente las plaquetas.

Introducción:
Las plaquetas son los elementos formes mas pequeños de la sangre, actúan en la hemostasia y en el mantenimiento de la integridad vascular, ademas de participar en el proceso de la coagulación sanguínea.

Las plaquetas son difíciles de contar debido a que son pequeñas y deben distinguirse de los restos celulares. otra fuente de dificultad reside ne en su tendencia de adherirse al cristal , a cualquier cuerpo extraño y en particular unas de otras.
Para el conteo de plaquetas se utiliza oxalato de amonio como diluyente y se cuentan en los mismos cuadros para glóbulos rojos y el resultado se multiplica por 1000.

Material y Reactivos

1. Pipeta de thoma para globulos blancos
2. Microscopio
3. Caja de Petri con papael filtro
4. Camara de Neubauer 
5. Oxalato de amonio al 1%
6. Sangre venosa con EDTA

Procedimiento 

1. Mezclar la sangre perfectamente.
2. Aspirar la muestra hasta la marca 0.5
3. Limpiar con una gasa el exceso de sangre y aspirar oxalato de amonio hasta la marca 11.
4. Mezclar de 3 a 5 min. desechar las 3 primeras gotas y llenar las cuadriculas de la cámara de Neubauer.
5. Dejar sedimentar de 10 a 15 min. la cámara en una caja petri con un disco de papel filtro húmedo en el fondo para evitar la evaporación.
6. Enfocar la camara y contar las plaquetas en los mismos cuadros para globulos rojos empleando el objetivo 40 X.
7. La plaquetas contadas se multiplican por  1 000 para obtener el numero de plaquetas por mm.
8. Valor de referencia
   
   
   150 000  a 450 000 

                       "TINCION DE WRIGHT " RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

Introducción

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en un frotis teñido de sangre.
Al conocer la protección de las células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyetico podría verse reflejado en un cambio de la proporción de una especie celular. Pare el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.
Hay varios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es el de almena y en linea.

Material y Reactivos

1.  Frotis sanguineo
2. Microscopio 
3. Aceite de inmersion 
4. Un contador de celulas

Procedimiento 

1. Se  coloca el frotis en el microscopio y  se enfoca.
2. Se le agrega una gota de aceite de inmersion y se observa con el objetivo de de 100 X
3. Si el recuento se hace en  linea de empieza en el borde de un frotis hasta el otro borde en la linea paralela hasta contar 100 leucocitos.
4. Se van contando los monucleares ( monositos y linfocitos ) y los polimorfonucleares ( neutofilos, eosinofilos y baofilos ) segun su morfologia.
5. Se reportan en % ( Valor relativo) o en valor absoluto ( mm3)

Valores de referencia

                     Adultos                                Niños 

Linfocitos            20-55 %       20 - 50 %               

  Monocitos           2 - 6 %                        0 - 9 %

Eosinofilos            1 - 5 %       0 - 8 %

Basofilos         0 - 1%                           0 - 1 %

Neutrofilos         45 - 70 %                      20 - 60 %

Bandas        0 - 5 %                               1 - 6 %

                     CONTEO DE LEUCOCITOS              

INTRODUCCION

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematología diagnostica. Para contar los leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con el liquido de Turk, que es una solución hipotonica que destruye a los eritrocitos y conserva la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neubauer y se cuenta el numero de células en los cuadros indicados.

               MATERIAL Y REACTIVOS                   

1. Pipeta de Thoma para glóbulos blancos.

2. Una cámara de Neubauer.

3. Un microscopio.

4. Solución de Turk.

5. Gasas.

6. Sangre venosa con EDTA.

PROCEDIMIENTO

1. Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente.

2. Aspirar sangre con la pipeta de Thoma hasta la marca 0.5.

3. Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.

4. Aspirar liquido de Thurk hasta la marca 11.

5. Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm.

6. Agitar la pipeta de Thoma de 3 a 5 min. y preparar la cámara con el cubrehematimetro.

7. Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematímetro, sin que se formen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.

8. Dejar reposar de 3 a 5 min. la cámara con la muestra.

9. Enfocar la cámara en 1 microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las 4 cuadriculas de los extremos.

10. Multiplicar el numero de leucocitos contados por 50.

                                      RESULTADO                                    

 Leucocitos 178.

178 x 50 = 8 900/mm3

VALOR DE REFERENCIA

5 000 a 10 000/mm3

Indices Eritrocitarios 

Propósito:

Para realizar esta practica es necesario obtener primero los valores de el conteo de eritrocitos, hemoglobina y hematocrito presentes en la sangre.

Materiales:

En este caso  se ocuparan todos los materiales necesarios que anteriormente se ocuparon para cada una de las practicas ya realizadas

Nota:

En esta practica solo se harán operaciones con los resultados obtenidos del Conteo de Eritrocitos, Hemoglobina y Hematocrito.

Formulas:

Valor Hematocrito% X 10

_____________________= V.C.C En M 3

N°  Eritrocitos / L               Valores Normales 

                                           82.92 M 3

Sustitución

44.3% X 10

___________= 9.4658 X10-5 

4,680,000 

Hemoglobina g/dl X 10

__________________= H.C.M en pg

N° de Eritrocitos / L      Valores Normales 

                                          29-32 pg

Sustitución

15.3 g/d X 10

___________= 3.2692 X10-5 

4.680,000

Hemoglobina g/d X 10

_________________= C.H.C.M En %

Valor Hematocrito%     Valores Normales

                                         32- 36 %

Sustitución:

15.3 g/d X 10

___________= 3.4537 

44.3%

HEMATOCRITO

PRACTICA # 3

INTRODUCCION:

El hematocrito es el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra de sangre y se expresa en porcentaje.

La determinación de hematocrito es un método sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.

El hematocrito se puede determinar por 2 métodos:

1.-MACROMETODO (WINTROBE)

2.-MICROMETODO.

MATERIAL Y REACTIVOS

Tubo de wintrobe

Tubo capilar.

Plastilina

Centrifuga

Microcentrifuga

Pipeta pasteur tallo largo

Equipo para venopuncion

Lector para hematocrito o regla

Sangre venosa

TECNICA MACROMETODO

 1.-Mezclar la muestra sanguínea suavemente y con una pipeta pasteur o canula llenar el tubo de wintrobe, colocando la punta de la pipeta hasta el fondo del tubo, la punta de la pipeta se va elevando permaneciendo por debajo del menisco de sangre para evitar la formación de burbujas o espuma.

2.-El tubo se llena hasta la marca 100 con la muestra sanguínea y se pone a centrifugar durante 3 minutos a 3000 r.p.m.

3.- Se efectúa la lectura.

TECNICA MICROMETODO

1.- mezclar la muestra sanguínea adecuadamente y llenar un tubo capilar hasta ¾ partes.

2.-El extremo vacio que no estuvo en contacto con la sangre se sella con plastilina o calor.

3.- El tubo con la muestra sanguínea se coloca en la microcentrifuga a 10,000 r.p.m. durante 10 minutos.

4.-Leer el porcentaje de hematocrito en el lector o leerlo con una regla.

Resultados:

Valores normales:

Hombres: 47.0  a 5.0

Mujeres: 42.0 a  5.0

Resultado Tubo de Wintrobe : 48 g/ dL
Resultado Tubo Capilar: 2.9 g/ dL